А.В. Санин, д.б.н, проф.,*, Т.Н. Кожевникова, к.м.н.*, О.Ю. Сосновская, к.б.н.,*, А.В. Изместьева*, А.В. Пронин, д.б.н., проф.,*, А.Н. Наровлянский, д.б.н., проф.,* С.В. Ожерелков, д.б.н., проф.**
*ФГБУ ФНИЦЭМ им. Н.Ф. Гамалеи Минздрава России, Москва, **** ФГБНУ ИПВЭ им. М.П. Чумакова, г. Москва
Ключевые слова: гамавит, имидокарба дипропионат, бабезиоз собак.
Сокращения: в/б – внутрибрюшинно, ИД – имидокарба дипропионат.
Введение
Заболеваемость собак бабезиозом (пироплазмозом) в Российской Федерации неуклонно растет. Причем изменилась как сезонность заболевания (нередки случаи, когда инвазированные бабезиями клещи активизируются и в зимние месяцы), так и его распространенность — вспышки отмечаются даже у городских собак. Отмечается также рост популяции инвазированных клещей, что ведет к повышению вероятности заражения собаки после укуса клеща. В качестве основного противопаразитарного препарата чаще всего назначают препараты на основе диминазена ацетурата или имидокарба. Однако их применение нередко сопровождается серьезными побочными эффектами, в частности передозировка приводит к тяжелой интоксикации [1,2,13]. В этой связи необходим поиск оптимальных детоксикантов, которые не только снизили бы возможные побочные эффекты таких препаратов, но и повысили эффективность их применения при лечении бабезиоза у собак. Одним из таких детоксикантов является препарат Гамавит, успешно применяемый при лечении бабезиоза для снятия интоксикации, стимуляции эритропоэза и иммунитета [2,6,7,11,12]. В настоящей работе представлены экспериментальные данные двойного слепого контролируемого рандомизированного исследования антитоксической эффективности Гамавита при применении имидокарба дипропионата в эксперименте.
Материалы и методы
1. Животные: мыши линии Balb/c массой 14–16 г, полученные из питомника «Столбовая» РАМН
2. Препараты: в экспериментах использовали препараты: Гамавит производства ЗАО «Микро-плюс», имидокарба дипропионат (ИД), 120 мг\мл.
В качестве отрицательного контроля использовали солевой раствор Хенкса и среду 199 на растворе Хенкса производства ФГУП ПИПВЭ им. М.П. Чумакова.
3. Постановка основного эксперимента.
Использовали метод рандомизации эксперимента и подбора животных в соответствии с рекомендациями, предложенными для ветеринарии [5]. Испытуемые пробы были изготовлены в научно-производственной лаборатории фирмы-производителя: в одинаковые флаконы емкостью 12 мл разливали по 10 мл жидкости одинакового красного цвета: среда 199, раствор Хенкса и гамавит. Флаконы произвольным образом шифровались, бумага с записью шифра хранилась в лабораторном сейфе в запечатанном конверте до конца испытаний. Исследователи, готовившие данные образцы, не знали о том, для какой цели те предназначены. Зашифрованные образцы были переданы с курьерской службой в ФГБНУ ИПВЭ им.М.П. Чумакова. Исследователи, ставившие опыты на мышах, не знали, что именно они вводят животным. Мыши были распределены по группам случайным образом. Конверт с шифрами был вскрыт через 1 сутки после завершения эксперимента. В опыте использовали пятикратную лечебную дозу Гамавита – 0,05 мл/мышь, обычно применяемую при острых отравлениях. Общая доза – 0,1 мл/мышь. Остальные пробы вводили в том же объеме. Первую дозу проб вводили мышам через 1 час после введения ИД на фоне начинающихся признаков острого отравления, перечисленных ниже, вторую – через 24 часа животным, как с признаками отравления, так и внешне здоровым. Признаками острого отравления ИД являлись: учащённое дыхание, вялость, взъерошенность шерсти, наблюдали также повышенную двигательную активность с последующими судорогами и гибелью. Развитие острой токсической реакции у мышей, инокулированных ИД, регистрировали через 1 – 24 часа после введения, после чего оценивали показатели летальности.
Результаты и обсуждение
На первом этапе исследований проводили проверку острой токсичности ИД. Развитие острой токсической реакции у мышей, получивших ИД, регистрировали через 1 – 24 часа после введения. Данные, представленные в Таблице 1, показывают, что высокие дозы препарата от 120 до 1,2 мг/мышь вызывали немедленную гибель животных в 100% с неврологической симптоматикой (судороги). При введении в дозе 0,6 мг/мышь ИД вызывал гибель животных в 100% случаев в течение первых 24-х часов после инъекции, доза 0,06 мг вызывала гибель 70% животных, а 0,03 – 40%. Доза 0,015 мг оказалась нетоксичной для животных. Таким образом, доза 0,6 мг/мышь соответствовала 1 ЛД100, после необходимых подсчётов была выявлена доза, соответствовавшая 1 ЛД50 – 0,045 мг/мышь
Таблица 1 Выявление доз имидокарба, соответствующих 1 ЛД100 , 1 ЛД70 и 1 ЛД50 для мышей при внутрибрюшинном введении препарата
группа животных: мышам вводиликоличество мышей в группекол-во павших общее кол-во в группелетальность (в %)ид 120 мг1010/10100ид 60 мг1010/10100ид 30 мг1010/10100ид 12 мг1010/10100ид 3,6 мг1010/10100ид 1,2 мг1010/10100ид 0,6 мг1010/10100ид 0,06 мг107/1070ид 0,03 мг104/1040ид 0,015 мг100/100
Дозировки препарата подбирали с учетом рекомендаций А.А. Зверева [4].
Для постановки основного эксперимента исходный препарат ИД разводили дистиллированной водой для инъекций в 10 раз и вводили мышам подкожно в количестве: 3,6 мг/мышь – 1 ЛД84 или 2,8 мг/мышь – 1 ЛД50.
Таблица 2
Антитоксическое действие 4-х проб в пятикратной лечебной дозе при их введении по дробной схеме с использованием доз ИД 1ЛД50 и 1ЛД84.
№№ группа животных: мышам вводиликоличество мышей в группекол-во павших общее кол-во в группелетальность (в %)1.ид 2,8 мг/мышь без введения проб158/15532. ид 2,8 мг/мышь + 0,1 мл пробы№1154/1521*3.ид 2,8 мг/мышь + 0,1 мл пробы № 2156/15404. ид 2,8 мг + 0,1 мл пробы №3155/15335. ид 3,6 мг/мышь без введения проб1514/15916. ид 3,6 мг/мышь +0,1 мл пробы №1159/1560*7. ид 3,6 мг+ 0,1 мл пробы №21512/1580**8. ид 3,6 мг + 0,1 мл пробы № 31511/1573**
* — разница между показателями летальности статистически достоверна в группах 1 и 2; 5 и 6,
** и недостоверна в группах 1 и 3; 1 и 4; 6 и 7; 6 и 8.
После введения пробы 1 у мышей на фоне начинающихся признаков отравления наблюдали отмену острой токсической реакции полностью (мыши выживали) или регистрировали ее через 24–72 часа после введения ИД. У мышей, которым вводили пробы 2 или 3, токсическая реакция сохранялась в течение 1–24-х часов.
После вскрытия конверта с шифрами оказалось, что проба 1 соответствует Гамавиту, проба 2 – раствору Хенкса, проба 3 – среде 199.
Таким образом, достоверное снижение токсичности имидокарба дипропионата, вводимого в дозах 1ЛД50 и 1ЛД84, вызывала проба 1 (Гамавит). Слабые антитоксические свойства были также выявлены при введении мышам забуференного солевого раствора Хенкса и среды 199 на растворе Хенкса, однако эти данные статистически недостоверны.
Гамавит является признанным детоксикантом, успешно применяемым как при лечении бабезиоза, так и при интоксикациях, вызываемых четырехлористым углеродом [10], солями тяжелых металлов [8], бактериальными токсинами [3], радионуклидами [8] и др., а также при клинически выраженных инфекциях и глистных инвазиях [11]. Высокая лечебная эффективность Гамавита при бабезиозе у собак подтверждена целым рядом исследователей [1,2,6,12]. Это связано также с наличием у препарата антиоксидантных и иммуномодулирующих свойств, а также его способности стимулировать костномозговой эритропоэз, что приводит к коррекции гемолитической анемии [3,9]. Гамавит способствует быстрой репопуляции эритроцитов, восстанавливает уровень гемоглобина и снижает воспалительную реакцию [3,9].
В настоящей работе с помощью принципов доказательной медицины показано, что Гамавит обладает антитоксической активностью по отношению к имидокарба дипропионату, препарату выбора при бабезиозе собак. Это позволяет рекомендовать Гамавит для включения в состав терапевтической схемы при бабезиозе собак.
Выводы:
1. Сочетанное применение Гамавита с имидокарба дипропионатом снижает токсичность последнего в контролируемом двойном слепом рандомизированном эксперименте на мышах.
Библиография

1. Белименко В.В. Бабезиоз собак в Оренбургской и Московской областях. Автореф. канд. дисс., М. 2008.
2. Георгиу Х., В.В. Белименко. Современные методы диагностики и терапии бабезиоза собак. РВЖ.МДЖ.2015, #2, с. 34–36.
3. Зайцева Л.Г., Бехало В.А., Васильев И.К., Годунов Р.С., И.В. Киреева, Т.Н. Кожевникова, Е.В. Нагурская, А.Н. Наровлянский, С.В. Ожерелков, А.В. Пронин, А.В. Санин. Коррекция функциональной активности перитонеальных макрофагов мышей Фоспренилом и Гамавитом при введении высоких доз a-токсина Staphylococcus aureus. – Журн. микробиол.- 2006.- №6.- С. 51–57.
4. Зверев А.А. Фармако-токсикологическая характеристика и терапевтическая эффективность имидокарба 5% при бабезиозе собак. Автореф.дисс.канд. М., 2008.
5. Кузнецов В.М. Основы научных исследований в животноводстве. Киров: Зональный НИИСХ Северо-Востока, 2006.- 568 с.
6. Леонард Р.А. Влияние гамавита, фоспренила и максидина на ряд биохимических показателей крови собак, больных пироплазмозом. Ветеринарная клиника. 2006. N3. с2–5.
7. Либерман Е.Л., Георгиу Х., В.В. Белименко. Опыт применения Гамавита при лечении кровепаразитарных болезней северных оленей. РВЖ.СХЖ.2014, #4, с. 31–33.
8. Обрывин В.Н., Жоров Г.А., Рубченков П.Н. Влияние препаратов гамавит и гала-вет на токсический иммунодефицит у белых крыс. Ветеринарная патология. – 2008. -№3.- С. 119–125.
9. Санин А.В. Гамавит – эффективное средство при экстракорпускулярных анемиях. Ветеринарная клиника 2009, №4 с. 16–19
10. Санин А.В., Ожерелков С.В., Сосновская О.Ю., Наровлянский А.Н., Пронин А.В. Протективный эффект Гамавита при острой интоксикации, вызванной четыреххлористым углеродом в эксперименте. РВЖ.СХЖ.N2. c. 40–42
11. Санин А.В., Ожерелков С.В., Зварцев Р.В., Пронин А.В., Наровлянский А.Н. Снижение острой токсичности препарата Имидосан под действием Гамавита – возможные перспективы при лечении бабезиоза собак РВЖ МДЖ 2009 №4 c. 56–58.
12. Санин А.В., Васильев И.К. Проблема снижения токсичности антипротозойных препаратов при бабезиозе собак. РВЖ.МДЖ. 2007 №2 с. 43–45.
13. Селиверстов А.С. Имидосан – шаг вперед в борьбе с пироплазмозом. Ветеринарная клиника 2009 №1–2, с. 13

РЕЗЮМЕ
Проблема оптимального выбора лечебного противопаразитарного препарата при бабезиозе собак в настоящее время остра, как никогда. Кроме того, необходим поиск детоксикантов, которые снижают возможные побочные эффекты таких препаратов. Одним из таких детоксикантов является Гамавит, применяемый при лечении бабезиоза для снятия интоксикации, стимуляции эритропоэза и иммунитета. В настоящей работе представлены экспериментальные данные по изучению эффективности Гамавита при снижении токсичности антибабезиозного препарата имидокарба дипропионат. После вскрытия конверта с шифрами, по данным слепого эксперимента оказалось, что достоверное снижение токсичности имидокарба дипропионата, вводимого в дозах 1ЛД50 и 1ЛД84, вызывал Гамавит. Таким образом, сочетанное применение Гамавита имидокарба дипропионатом снижает токсичность последнего в контролируемом двойном слепом рандомизированном эксперименте на мышах.
SUMMARY
Double blind randomized controlled in vivo trial of antitoxic effect of Gamavit against Imidocarb dipropionate A.V. Sanin, T.N. Kozhevnikova, O.Yu.Sosnovskaya, A.V. Izmest'eva, A.V. Pronin, A.N. Narovlyansky, S.V. Ozherelkov Gamavit is a veterinary drug traditionally used as a detoxicant and hematopoiesis stimulant during therapy of canine babesiosis. Here presented are results of double blind randomized controlled in vivo trial of antitoxic effect of Gamavit against Imidocarb dipropionate. We found that Gamavit exerted significant antitoxic effect in mice, and so may be used as effective detoxicant while treating canine babesiosis.
Сведения об авторах
Александр Владимирович Санин – доктор биол. наук, профессор, рук. лаб. клеточного иммунитета ФГБУ ФНИЦЭМ им. Н.Ф. Гамалеи Минздрава РФ, Москва saninalex@inbox.ru тел. 8–985–226–2897
Татьяна Николаевна Кожевникова, ответственная за переписку – кандидат медицинских наук, научный сотрудник лаб. клеточного иммунитета ФГБУ ФНИЦЭМ им. Н.Ф. Гамалеи Минздрава РФ tatiana@micro-plus.ru
Ольга Юрьевна Сосновская, старший научный сотрудник лаб. клеточного иммунитета ФГБУ ФНИЦЭМ им. Н.Ф. Гамалеи Минздрава РФ
Анна Васильевна Изместьева, младший научный сотрудник лаборатории цитокинов ФГБУ ФНИЦЭМ им. Н.Ф. Гамалеи Минздрава РФ
Александр Васильевич Пронин, – доктор биол. наук, профессор, зам.директора ФГБУ ФНИЦЭМ им. Н.Ф. Гамалеи Минздрава РФ, Москва
Александр Наумович Наровлянский – доктор биол. наук, профессор, рук.лаборатории цитокинов ФГБУ ФНИЦЭМ им. Н.Ф. Гамалеи Минздрава РФ, Москва
Сергей Викторович Ожерелков, -доктор биологических наук, профессор, руководитель лаборатории ИПВЭ им.М.П. Чумакова РАМН, г. Москва